NK培養(yǎng)基是為哺乳生物來源的NK細胞培養(yǎng)而設計的，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質、血清替代物以及其他補給成分。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定的核心是采用無血清替代物為細胞提供一個營養(yǎng)全面和平衡的環(huán)境，不僅包括NK細胞生長的一切養(yǎng)分，還包括促進DC細胞吸附、活化、增殖的添加物，產品適用于人及哺乳類動物NK細胞的培養(yǎng)、活化及增殖。
NK培養(yǎng)基產品特點：
1、培養(yǎng)性能*，支持高密度NK細胞培養(yǎng)；
2、可以培養(yǎng)純度比較低的細胞樣品，培養(yǎng)獲得高純度的NK細胞（CD56+/CD3-）；
3、如果培養(yǎng)時添加病人自體血漿，效果更為顯著；
4、經過微生物檢測（細菌、真菌、霉菌及支原體）、pH檢測、滲透壓和內毒素檢測；
5、不含任何動物源的蛋白成分。
NK培養(yǎng)基培養(yǎng)操作步驟
1、培養(yǎng)皿的包被：按一個10-cm培養(yǎng)皿的表面積計算，將2mlAdvCell細胞墊(BCP0001)與20lAdvCellNK細胞附物(BNKA001)混合后加入培養(yǎng)皿中，4℃下包被過夜。
2、按常規(guī)免疫細胞培養(yǎng)的一般準則，如需在生物反應器或培養(yǎng)袋中高密度培養(yǎng)，應優(yōu)化條件來確定操作步驟。使用前將BNSFM0001中的5種組分按如下體積比在37℃下解凍之后混合混合成*培養(yǎng)基:500mlAdvCell免疫細胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）、20mlAdvCell免疫細胞添加物A（BICS0001A）、1mlAdvCell免疫細胞添加物B（BICS0001B）、1mlAdvCellNK細胞添加物A(BNKS001A)、1mlAdvCellNK細胞添加物B(BNKS001B)。
3、抽取患者外周血50ml，將采集的血樣轉入50ml離心管，2000rpm離心10min。離心結束后，用移液器吸取上層淡黃色血清于新的50ml離心管，蓋好離心管蓋于40℃水浴鍋中孵育30min。孵育結束后，再1400rpm(340g)離心10min,吸取上清于新的離心管保存4℃?zhèn)溆谩?/div>
4、用移液管將下層的血細胞與生理鹽水1:1混勻，按1：1將懸液緩慢加入裝有淋巴細胞分離液的離心管（注意：不要打亂液面分界保持液面分層明顯）。將離心機的升速與降速調至低，400g離心30min；離心結束后，用5ml移液管吸取中間白膜層于新的50ml離心管，并用生理鹽水洗滌離心兩次，以去除多余血細胞。
5、根據(jù)計數(shù)結果調整細胞濃度，充分混勻后按1-2×106/ml密度接種于含免疫細胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）的培養(yǎng)瓶中，并按10-cm培養(yǎng)皿的表面積添加20lAdvCellNK細胞添加物B（BNKS001B）。當細胞生長到第三天離心換液（340g離心10min）更換新鮮培養(yǎng)基及AdvCellNK細胞添加物B。
6、以后4-6天每天鏡檢觀察，根據(jù)細胞懸液顏色添加培養(yǎng)液，每次添加應為總體積的三分之一左右。第七天計數(shù)，當細胞量大于6×107時，則添加AdvCellNK細胞添加物B；如細胞數(shù)量在3-6×107時，則長至第八天添加AdvCellNK細胞添加物B，加液時使總細胞濃度保持在1-1.5×106cell/ml。
7、當培養(yǎng)液體積大于150ml或細胞數(shù)量大于1.5×108時則需轉移至培養(yǎng)袋培養(yǎng)（氣泡盡量排空，以免影響細胞生長）。第8-11天每天鏡檢觀察計數(shù)，根據(jù)細胞懸液顏色加培養(yǎng)液。第12-14天觀察需加液時，細胞濃度需保持在2×106cell/ml。當細胞達到所需劑量時，即可離心收集細胞待用。
以上就是NK培養(yǎng)基的產品特點和七個培養(yǎng)步驟介紹，給大家參考，并希望有所幫助！
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