澳洲胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分少。
澳洲胎牛血清主要用途:
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2.提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
具體澳洲胎牛血清制備操作方法如下:
首先、血液采集
1、挑選出大約8月齡以上的健康妊娠母牛,經(jīng)剖腹獲取小牛。
2、將小牛清洗干凈后,側(cè)放在萬級潔凈房間內(nèi)的采血臺上,固定四肢及頭部。
3、用來蘇水清洗心臟外部,刮去心臟外部牛毛,露出心臟外部一側(cè)皮膚,用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心臟部位切開一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采血管流入另一個潔凈房間內(nèi)的采血瓶中。
5、采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時)后,按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采血前半小時放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動瓶內(nèi)生理鹽水,使其充分濕潤瓶壁后倒出,再進(jìn)行采血并加塞封口。將采血后的采血瓶放37℃恒溫室2小時,再放入4℃冷庫4小時以備離心。
第二步、離心
將準(zhǔn)備好的采血瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對稱放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。
第三步、抽血清
取出4℃冷庫離心好的采血瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采血瓶內(nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。
第四步、澳洲胎牛血清過濾
1、將-20℃冷庫內(nèi)的粗制血清取出化凍。
2、將化凍后的粗制血清用經(jīng)過高壓滅菌的12層醫(yī)用脫脂棉紗布進(jìn)行初濾。
3、把初濾后的血清倒入大罐進(jìn)行混合。
4、將裝好濾芯的濾器做密封性試驗和發(fā)泡試驗合格后,經(jīng)過高壓滅菌,在潔凈室內(nèi)用無菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進(jìn)行組裝,并裝上壓力表。把濾器大孔徑一端和蠕動泵出口進(jìn)行連接。
5、用蠕動泵將大罐內(nèi)的血清送入濾器進(jìn)行過濾。
6、將濾出的血清在百級凈化操作臺上進(jìn)行分裝后,即為精制胎牛血清,送-20℃冷庫儲存。