細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。
細(xì)胞凍存技術(shù)作為一種保存細(xì)胞的有效方法,在生物學(xué)領(lǐng)域已有深入廣泛的應(yīng)用。因?yàn)檎G闆r下,直接冷凍細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生冰晶對(duì)細(xì)胞造成傷害,從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。所以需要通過(guò)添加冷凍保護(hù)劑配制細(xì)胞凍存液,來(lái)保護(hù)細(xì)胞。
常用的細(xì)胞凍存液通常為胎牛血清中添加10%二甲基亞砜(DMSO),二甲基亞砜(DMSO),可以減少冰晶的形成,減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害,改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性,可以很好地在細(xì)胞凍存過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞。
操作使用:
1、按照常用方法懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞收集于離心管中。
2、1000rpm-1500rpm,5min離心,棄上清液。
3、加入適量的Serum-Free細(xì)胞凍存液于離心管中,推薦細(xì)胞凍存濃度為 1×106 - 1×107 cells/ml。緩慢混合均勻,制成細(xì)胞懸液。
4、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示*的冷凍保存管中。
5、直接將凍存細(xì)胞放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入移至-196℃液氮罐長(zhǎng)期冷凍保存。